Laporan Mikrobiologi Media Pertumbuhan Mikroba

BAB I

PENDAHULUAN

1.1             1.1  Latar Belakang

Kita tahu bahwa semua makhluk hidup membutuhkan nutrient untuk pertumbuhan dan reproduksinya. Nutrien merupakan bahan baku yang digunakan untuk membangun komponen-komponen seluler baru dan untuk menghasilkan energy yang cdibutuhkan dalam proses kehidupan sel.

            Untuk membutuhkan dan mengembangbiakkan mikroba diperlukan suatu substrat yang disebut medium. Sedangkan medium itu sendiri sebelum digunakaan harus dalam keadaan steril artinya tidak ditumbuhi oleh mikroba lain yang tidak diharapkan agar mikroba dapat tumbuh dan berkembangbiak dengan baik di dalam medium, maka diperlukan syarat tertentu yang diantaranya bahwa didalam medium harus terkandung semua unsur hara yang diperlukan untuk pertumbuhan dan perkembangan mikroba kemudian susunan makanannya, tekanan osmosis, derajar, keasaman (pH), temperature, sterilisasi.    

Perlu kita ketahui pembuatan media didasarkan pada fungsi, komposisi media, dan konsistensinya sehingga dalam kultur atau media yang dibuat dapat menumbuhkan mikroba dengan baik dan sesuai dengan baik dan sesuai dengan yang diharapkan.

            Yang melatar belakangi praktikum pembuatan media adalah agar praktikan dapat menambah pengetahuan mengenai cara pembuatan medium pertumbuhan mikroba.

1.2             1.2  Tujuan

-          Mengetahui fungsi dari masing-masing medium

-          Mengetahui cara pembuatan medium NA (nutrient agar )

-          Mengetahui cara pembuatan medium PDA (potato dextrose agar)

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

            Media adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat hara (nutrient) yang berguna untuk membiakkan mikroba. Dengan mempergunakan bermacam-macam media dapat dilakukan isolasi, perbanyakan, pengujian sifat-sifat fisiologis dan perhitungan jumlah mikroba (Sutedjo,1996).

            Supaya mikroba dapat tumbuh baik dalam suatu media, maka medium tersebut harus memenuhi syarat-syarat antara lain :

a.       Harus mengandung semua zat hara yang mudah digunakan oleh mikroba

b.      Harus mempunyai tekanan osmosa, tegangan permukaan dan pH yang sesuai dengan kebutuhan mikroba yang ditumbuhkan

c.       Harus mengandung zat-zat yang dapat menghambat pertumbuhan mikroba

d.      Harus berada dalam keadaan steril sebelum digunakan, agar mikroba yang diinginkan dapat tumbuh baik (Sutedjo,1996).

Macam-macam media

            Media dapat digolongkan berdasarkan atas susunan  kimianya, sifat wujudnya dan fungsinya. Penggolongan media berdasarkan susunan kimia :

1.      Media anorganik. Yaitu media yang tersusun dari bahan-bahan anorganik

2.      Media organik. Yaitu media yang tersusun dari bahan-bahan organik

3.      Media sintetik (media buatan). Yaitu media yang susunan kimianya diketahui dengan pasti. Media ini umumnya digunakan untuk mempelajari kebutuhan makanan suatu mikroba

4.      Media non sintetik. Yaitu media yang susunan kimianya tidak dapat ditentukan dengan pasti. Media ini umumnya digunakan untuk menumbuhkan dan mempelajari taksonomi mikroba (Sutedjo,1996).

Penggolongan media berdasarkan sifat wujudnya

1.      Media cair yaitu media yang berbentuk cair

2.      Media padat. Yaitu media yang berbentuk padat. Media ini dapat berupa bahan organik alamiah, misalnya yang dibuat dari kentang, wortel, dan lain-lain, atau dapat juga berupa bahan anorganik misalnya silica gel

3.      Media padat yang dapat dicairkan, (semi solid), yaitu yang apabila dalam keadaan panas berbentuk cair, sedangkan dalam keadaan dingin berbentuk padat, misalnya media agar (Sutedjo,1996).

Penggolongan media berdasarkan fungsinya

1.      Media diperkaya. Yaitu media yang ditambahi zat-zat tertentu misalnya serum darah ekstrak tanaman dan lain sebagainya, sehinggan dapat digunakan untuk menumbuhkan mikroba yang bersifat heterotrof.

2.      Media selektif. Yaitu media yang ditambahi zat kimia tertentu untuk mencegah pertumbuhan mikroba lain (bersifat selektif). Misalnya media yang mengandung Kristal violet pada kadar tertentu dapat mencegah pertumbuhan bakteri gram positif tanpa mempengaruhi pertumbuhan bakteri gram negative.

3.      Media diferensial. Yaitu media yang ditambahi zat kimia (bahan) tertentu yang menyebabkan suatu mikroba membentuk pertumbuhan atau mengadakan perubahan tertentu sehingga dapat dibedakan tipe-tipenya. Misalnya media daerah agar dapat digunakan untuk membedakan bakteri homolitik (pemecah darah) dan bakteri non hemolitik.

4.      Media penguji. Yaitu media dengan susunan tertentu yang digunakan untuk pengujian vitamin. Vitamin asam-asam amino, antibiotika dan lain sebagainya.

5.      Media untuk perhitungan jumlah mikroba. Yaitu media spesifik yang digunakan untuk menghitung jumlah mikroba dalam suatu bahan.

6.      Media khusus. Yaitu media untuk menentukan tipe pertumbuhan mikroba dan kemampuannya untuk mengadakan perubahan-perubahan kimia tertentu (Sutedjo,1996).

Cara pembuatan media

            Garis besar pembuatan media yang tersusun atas beberapa bahan adalah sebagai berikut :

a.       Mencampur bahan-bahan : bahan-bahan yang dilarutkan dalam air suling. Kemudian dipanaskan dalam pemanas air supaya larutannya homogeny.

b.      Menyaring : beberapa jenis media kadang-kadang perlu disaring, dan sebagai penyaringan dapat digunakan kertas saring, kapas atau kain. Untuk media agar atau gelatin penyaringan harus dilakukan dalam keadaan panas.

c.       Menentukan dan mengatur pH : penentuan pH media dapat dilakukan dengan menggunakan kertas pH, pH meter atau dengan komparator blok. Pengaturan pH media dapat dilakukan dengan penambahan asam atau basa (organik atau anorganik).

d.      Memasukkan media ke dalam tempat tertentu : sebelum disterilakan, media dimasukkan ke dalam tabung reaksi, Erlenmeyer atau wadah lain yang bersih, kemudian dibungkus kertas sampul (kertas perkamen) supaya tidak basah sewaktu disterilkan.

e.       Sterilisasi : pada umumnya sterilisasi media dilakukan dengan uap panas di dalam autoclave, pada suhu 121^◦ C selama 15-30 menit (Sutedjo,1996).

Media biak dan persyaratan bagi pertumbuhan.

            Media biak kompleks. Untuk banyak mikroorganisme bertuntutan tinggi belum dikenal benar bahan-bahan makanan yang diperlukan. Orang membiakkannya dalam larutan biak yang mengandung ekstrak ragi, otolisat ragi, pepton, atau ekstak daging. Untuk beberapa kelompok organisme lazim juga digunakan : rempah-rempah, dekok rumput kering, sari buah prem, sari buah wortel, santan dan untuk cendawan kupofil juga sari perasan tahi kuda. Mengingat biaya, larutan-larutan baik tidak dibentuk dari senyawa-senyawa murni tetapi lebih disukai untuk menggunakan zat-zat kompleks, seperti air didih, melaso, air rendaman jagung atau ekstrak kedelei, yang sebagai produk sisa tersedia dengan harga murah. Media bak seperti ini disebut media bak kompleks. (Schlegel, 1994).

Media biak padat. Untuk membuat bak padat pada larutan bak cair di tambahkan bahan pemadat yang member konsistensi seperti selai pada larutan air. Hanya untuk keperluan tertentu masih digunakan gelatin, karena sudah mencair pada suhu 26-30⁰ C dan banyak mikroorganisme mampu mencairkan gelatin.

Kadar ion hydrogen. Diantara semua ion, ion H⁺ dan OH^- adalah ion-ion yang paling mobil ; oleh sebab itu perubahan kadar yang kecil saja sudah menimbulkan pengaruh yang besar. (Schlagel, 1994).

Karbondioksida, larun bak yang diperlukan untuk pertumbuhan mikroorganisme yang ototrof yang memfikasi CO₂ biasanya ditambahi Na- bikarbonat dan diinkubasi dibawah atmosfir yang mengandung CO₂ dalam wadah tertutup (Schlagel, 1994).

Kadar air dan tekanan osmotik. Mikroorganisme menunjukkan perbedaan yang luas dari segi tuntutan keperluan akan kadar air (Schlagel, 1994).

Suhu. Memilih tuntutan mengenai suhhu inkubasi miroorganisme berbeda-beda prilakunya.

Aerasi untuk semua mikroorganisme aerob obligat, oksigen merupakan akseptor electron yang sangat penting.

Biak anaerob. Untuk menumbuhkan jenis bakteri yang anaerob kuat penyingkiran O₂ udara merupakan persyaratan yang amat perlu (Schlegel, 1994)

Zat hara yang ditambahkan ke dalam media.

Untuk pertumbuhan diperlukan zat hara. Berbagai zat hara yang diperlukan adalah :

Nitrogen :

Pada umumnya bakteri tidak dapat langsung menggunakan N₂ bebas dari udara, sehingga keperluannya diberikan dalam bentuk garam. Nitrogen diperlukan sebagai bahan dasar untuk protein, asam nukleat dan vitamin. Dalam media bahan yang mengandung N ini berupa :

-       NH₄Cl –N inorganik

-       NaNO₃

-       Pepton –N organik

Karbon :

            Sebagai sumber karbon digunakan bernagai gula, pati, glikogen. Gula yang dipakai berupa 5C,6C, atau disakarida (laktosa, sukrosa, dan maltose). Untuk dapat menggunakan sumber karbon ini bakteri dapat menguraikannua menjadi molekul yang lebih kecil yang kemudian digunakan untuk bahan dasar protein, polisakarida, lipida dan asam nukleat.

Vitamin dan Faktor pertumbuhan :

            Berbagai vitamin yang diperlukan bakteri adalah thiamine, riboflavin, asam nikotinat, asam pantotenas biotin. Vitamin ini berfungsi sebagai koenzim atau bagian lain dari bahan dasar sel (Hastowo,1992).

BAB III

METODE KERJA

3.1 Waktu dan Tempat

            Praktikum kedua ini melakukan percobaan tentang media pertumbuhan mikroba yang dilaksanakan pada hari Rabu, pada tanggal 16 Maret 2011 pukul 10.00-12.00 WITA. Bertempat di Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Mulawarman Samarinda.

3.2 Alat dan Bahan

3.2.1 Alat-alat

-    Gelas kimia

-    Gelas ukur

-    Hot plate

-    Autoclave

-    Saringan

-    Tabung reaksi

-    Rak tabung reaksi

-    Pipet volume

-    Timbangan (neraca)

-    Erlenmeyer

-    Magnetic stirrer

-    Batang pengambil magnetic stirerr

-    Indicator pH

-    Gelas beker

-    Wadah (mangkuk)

-    Pensil

-    Inkubator

3.2.2 Bahan-bahan

-    Ekstrak daging

-    Ekstrak kentang

-    Pepton

-    Dextrose

-    Agar-agar

-    NaCl

-    Aquades

-    Chloramphenicol

-    Alumunium foil

-    Karet gelang

-    Kertas

-    Indikator pH / kertas lakmus

3.2 Cara Kerja

      3.3.1   Media nutrient agar (NA)

1.      Ditakar ekstrak daging sebanyak 250 ml menggunakan gelas ukur

2.      Dicampurkan ekstrak daging 250 ml dengan pepton sebanyak 1,25 gr dan agar-agar 3,75 gr kedalam Erlenmeyer

3.      Dipanaskan diatas hot plate hingga mendidih sambil diaduk dengan magnetic stirrer sampai larutan homogen

4.      Diukur kadar keasaman (pH)

5.      Dimasukkan ke dalam 2 buah Erlenmeyer masing-masing sebanyak 125 ml

6.      Ditutup mulut Erlenmeyer menggunakan alumunium foil

7.      Dimasukkan ke dalam autoclave untuk disterilkan beserta alat-alat yang akan digunakan, autoclave pada suhu 121^oC dan tekanan 15 psi

3.3.2    Media potato dextrose agar (PDA)

1.      Ditakar ekstrak kentang sebanyak 250 ml menggunakan gelas ukur

2.      Dicampurkan ekstrak kentang 250  ml dengan dextrose 2,5 gr dan agar-agar 3,75 gr ke dalam Erlenmeyer

3.      Dipanaskan diatas hot plate hingga mendidih sambil diaduk dengan menggunakan magnetic stirrer sampai homogen, lalu dibiarkan beberapa saat

4.      Dilarutkan chloromphenicol dengan aquades sebanyak 10 ml ke dalam media ekstrak kentang

5.      Dihomogenkan kemudian diukur kadar keasamannya (pH)

6.      Ditutup mulut Erlenmeyer menggunakan alumunium foil, kemudian dibungkus dengan kertas

7.      Dimasukkan ke dalam autoclave untuk disterilokan beserta alat-alat yang akan digunakan, autoclave pada suhu 121^oC dan tekanan 15 psi

3.3.3    Garam fisiologis

-          Ditakar 150 ml aquades dengan labu takar

-          Dicampurkan 1,275 gr NaCl dengan 150 ml aqudes kedalam Erlenmeyer

-          Dihogenkan menggunakan magnetic stirrer

-          Dimasukkan ke dalam tabung reaksi masing-masing 9 ml

-          Ditutup mulut tabung reaksi menggunakan alumunium foil , kemudian dibungkus dengan kertas

-          Dimasukkan ke dalam autoclave untuk disterikan beserta alat-alat yang akan digunakan, autoclave pada suhu 121^oC dan tekanan 15 psi

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1  Hasil pengamatan

4.1.1        Tabel hasi pengamatan media pertumbuhan bakteri

No.	Media	Keterangan
01.		-          Warna awal pengamatan, berwarna kuning. Setelah pemanasan warna media agak cokelat -          Komposisi : kaldu daging 250 ml, pepton 1,25 gr, dan agar 3,75 gr -          pH = 7

4.1.2        Tabel hasil pengamatan media pertumbuhan jamur

No.	Media	Keterangan
02.		-          Warna awal pengamatan, sebelum proses pemanasan berwarna keruh, setelah pemanasan warna media agak cokelat muda -          Komposisi : kaldu kentang 250 ml, dextrose 2,5 gr, dan agar 3,75 gr, ditambah chloromphenicol -          pH = 5,9

4.3 Pembahasan

            Pada media NA digunakan ekstrak daging karena daging sebagai sumber vitamin B, mengandung nitrogen organik, dan senyawa karbon. NA adalah nutrient agar. Pada media PDA (potato dextrose agar) digunakan ekstrak kentang karena kentang sebagai sumber karbon (karbohidrat), vitamin, dan energy. Dextrose sebagai sumber gula dan energy, dan agar berguna untuk mendapatkan media PDA. Pepton sebagai sumber protein, karbohidrat, dan penghasil nitrogen. Dan diberi agar sebanyak pemadat media NA.

            Pembuatan media nutrient agar (NA) berasal dari bahan ekstrak daging sebanyak 250 ml, lalu dicampurkan dengan pepton sebanyak 1,25 gr dan agar 3,75 gr. Dipanaskan diatas hot plate hingga mendidih, wadah yang digunakan adalah Erlenmeyer. Campuran ini selama dipanaskan juga diaduk menggunakan magnetic stirrer, setelah itu diuku pHnya, sesuai standarisasinya.

            Media adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat hara (nutrient) yang berguna untuk membiakkan mikroba. Dengan menggunakan bermacam-macam media dapat dilakukan isolasi, perbanyakan, pengujian sifat-sifat fisiologis dan perhitungan juimlah mikroba (schlegel,1994).

            Tujuan dalam pembuatan media untuk wadah membiakkan mikroba, sehingga mikroba dapat tumbuh baik dalam suatu media yang telah dibuat.

            Chloromphrnicol adalah antibiotik yang diberikan pada media yang berfungsi untuk membunuh mikroba-mikroba yang tidak diinginkan supaya mikroba yang akan kita buat tidak terganggu atau dengan kata lain agar media tidak terkontaminasi (Sutedjo,1996).

            Pada pembuatan media NA, ekstrak daging 250 ml, dicampurkan pepton 1,25 gr, dan agar 3,75 gr.didapatkan pada awal pengamatan, berwarna kuning. Setelah pemanasan didapatkan hasil warna media agak cokelat, dan diukur keasamannya (pH). pH yang ada pada NA sudah sesuai dengan standarisasi pH 6,8-7,0 , pH NA adalah 7. Sehingga tidak harus diberi tambahan NaCl. Kemudian pada pembuatan media potato dextrose agar dengan menggunakan bahan dasar ekstrak kentang 250 ml, ditambah dextrose 2,5 gr, dan agar 3,75 gr ditambah chloramphenicol. Didapatkan pada awal pengamatan, sebelum proses pemanasan berwarna keruh, setelah dilakukan pemanasan didapatkan hasil warna media agak cokelat muda, kemudian diukur keasamannya didapatkan pH 5,9.

            Pada pembuatan larutan garam fisiologis aquades dan NaCl ditakar untuki membuat larutan NaCl 0,85%, larutan distirer supaya larutan aquades dan NaCl tercampur. Mulut tabung reaksi ditutup dengan menggunakan alumunium foil dan dibungkus dengan kertas, dilakukan ini berfungsi untuk media tetap steril, tidak terkontaminasi terhadap mikroorganisme yang ada diluar. Kemudian larutan disteril menggunakan autoclave, ini berfungsi untuk membunuh semua mikroorganisme yang terdapat dalam larutan.

            Dalam melakukan percobaan dilakukan beberapa perlakuan yaitu menakar ekstrak kentang dan daging agar sesuai dengan komposisi yang ada. Memanaskan atau autoclave larutan agar mikroorganisme yang lain mati. Menggunakan sstirer agar larutan menjadi larutan homogen. Menutup mulut Erlenmeyer dengan alumunium foil agar tidak ada mikroorganisme yang masuk.

            Faktor kesalahan terjadi apabila pada saat pemanasan diatas hot plate tidak hati-hati sehingga air mendidih dan berhamburan keluar dari Erlenmeyer.

BAB V

PENUTUP

5.1 Kesimpulan

Dari praktikum pada media pertumbuhan mikroba dapat disimpulkan bahwa :

-       Fungsi medium (NA) berdasrkan susunan kimianya merupakan medium non sintetik atau semi ilmiah, berdasarkan konsistennya merupakan medium padat, untuk menumbuhkan bakteri, (PDA) termasuk media padat, berdasarkan susunan kimianya termasuk sintetik untuk menumbuhkan jamur.

-       Pembuatan media (NA) menggunakan bahan utama ekstrak daging 250 ml dengan komposisi pepton sebanyak 1,25 gr dan agar 3,75 pada pembuatan media ini ditambahkan pepton agar mikroba cepat tumbuh karena mengandung N₂

-       Pembuatan medium (PDA) menggunakan bahan utama ekstrak kentang 250 ml dengan komposisi dextrose 2,5 gr dan agar 3,75 gr. Pada media ini ditambahkan chlorainphericol sebagai antibiotik sehingga mikroba yang tidak digunakan tidak tumbuh.

5.2 Saran

Sebaiknya pada saat praktikum, dilakukan dengan berhati-hati, pada saat pemanasan menggunakan hot plate harus diperhatikan agar tidak terjadi air mendidih dan bertumpahan keluar.

DAFTAR PUSTAKA

Hastowo, Sugyo. 1992. Mikrobiologi. Institut Pertanian Bogor : Bogor

Schlegel, Hans G. 1994. Mikrobiologi Umum. Gajah Mada University Press : Yogyakarta

Sutedjo, Mul Mulyani. 1996. Mikrobiologi Tanah. Rineka Cipta : Jakarta